重組鵝IFN-α在大腸桿菌中的表達(dá)及抗血清制備
摘要：為了研究鵝α干擾素(goIFN-α)基因原核表達(dá)產(chǎn)物的反應(yīng)原性并進(jìn)行g(shù)oIFN-α抗血清的制備,試驗(yàn)首先根據(jù)大腸桿菌偏愛密碼子對goIFN-α基因進(jìn)行優(yōu)化,隨后采用PCR方法擴(kuò)增goIFN-α編碼序列并進(jìn)行同源性分析。將goIFN-α片段與表達(dá)載體pET-28a連接,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-goIFN-α,然后將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot檢測。通過切膠回收的方法回收目的條帶,將碾碎的蛋白膠與PBS混合后注入小鼠體內(nèi),15 d后回收血清進(jìn)行Western-blot檢測。結(jié)果表明:試驗(yàn)成功擴(kuò)增出goIFN-α基因;與多種IFN-α基因序列進(jìn)行比較,goIFN-α基因氨基酸序列的同源性為92.5%~98.1%;隨后成功構(gòu)建出重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-goIFN-α,并將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,重組蛋白goIFN-α的分子質(zhì)量約為18 ku,具有良好的反應(yīng)原性;回收血清進(jìn)行Western-blot檢測,鼠抗goIFN-α血清制備成功。說明重組goIFN-α蛋白能夠在大腸桿菌中表達(dá),大小符合預(yù)期且具有良好的反應(yīng)原性,并成功制備出鼠抗goIFN-α血清。
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黑龍江畜牧獸醫(yī)雜志
黑龍江畜牧獸醫(yī)雜志， 半月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅(jiān)持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進(jìn)性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：探討與研究、畜牧科學(xué)、獸醫(yī)科學(xué)、飼草、飼料與添加劑、動(dòng)物保健品研究、信息、特種動(dòng)物研究、教育與教學(xué)等。于1958年經(jīng)新聞總署批準(zhǔn)的正規(guī)刊物。
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