VEGF和Smad7雙基因過表達慢病毒載體的構(gòu)建
摘要：目的:構(gòu)建過表達VEGF和Smad7雙基因的慢病毒載體,為勃起功能障礙基因治療的研究提供有效工具。方法:根據(jù)GenBank中基因信息,設(shè)計合成VEGF和Smad7引物,采用overlap PCR方法擴增目的基因片段,運用基因重組技術(shù)將其克隆至慢病毒表達載體Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin,經(jīng)酶切、測序?qū)χ亟M質(zhì)粒進行驗證。將重組質(zhì)粒和Helper1.0、pHelper2.0輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,包裝雙基因過表達慢病毒并測試其滴度。結(jié)果:經(jīng)酶切和測序鑒定表明VEGF和Smad7雙基因重組慢病毒載體構(gòu)建成功,熒光法測定重組慢病毒滴度高(2E+8TU/mL)。VEGF和Smad7重組慢病毒能高效轉(zhuǎn)染293T細胞,Western blot檢測顯示VEGF和Smad7蛋白在靶細胞中過表達。結(jié)論:成功構(gòu)建了攜帶VEGF和Smad7基因并能正確表達的高滴度的重組慢病毒載體。
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交通醫(yī)學雜志
交通醫(yī)學雜志， 雙月刊，本刊重視學術(shù)導向，堅持科學性、學術(shù)性、先進性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：論著與經(jīng)驗交流、論著與基礎(chǔ)研究、醫(yī)學教學、護理園地、交通創(chuàng)傷、綜述、疫情防控、再生醫(yī)學、調(diào)查報告、預防醫(yī)學、智能醫(yī)學與智慧醫(yī)療、醫(yī)院管理等。于1987年經(jīng)新聞總署批準的正規(guī)刊物。
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