利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建FHL1基因敲除的HepG2穩(wěn)定細胞株及其功能鑒定
作者：張亞楠; 常振宇; 劉婕; 丁麗華; 葉棋濃 軍事科學院、軍事醫(yī)學研究院生物工程研究所; 北京100850; 解放軍總醫(yī)院肝膽外二科; 北京100853
摘要：目的:利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除人肝癌細胞HepG2中的四個半LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1(FHL1)基因,構(gòu)建FHL1基因敲除的HepG2穩(wěn)定細胞株。方法:根據(jù)CRISPR/Cas9靶點設計規(guī)則,設計特異性識別FHL1基因第三外顯子相關(guān)序列的上下游小向?qū)NA,構(gòu)建真核重組表達質(zhì)粒,測序鑒定后,將重組質(zhì)粒包裝慢病毒感染HepG2細胞,用嘌呤霉素抗性篩選穩(wěn)定敲除FHL1基因的細胞株,用免疫印跡法鑒定HepG2細胞中FHL1基因的敲除效果,利用生長曲線實驗和劃痕實驗檢測基因敲除對細胞生長和遷移的影響。結(jié)果:篩選出敲除FHL1基因的HepG2細胞株,且FHL1基因敲除顯著促進細胞的增殖和遷移。結(jié)論:利用CRISPR/Cas9技術(shù)獲得了內(nèi)源FHL1基因敲除細胞株,初步實驗提示敲除FHL1基因可以促進肝癌細胞增殖和遷移,為后續(xù)研究FHL1在肝癌中的功能奠定了基礎(chǔ)。
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生物技術(shù)通訊雜志
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