重組人表皮生長因子包涵體的表達(dá)、純化及復(fù)性
作者：王強; 段云飛; 徐燕; 張超; 冷曉燕 江蘇邁健生物科技發(fā)展股份有限公司; 江蘇無錫214000
摘要：目的:通過優(yōu)化人表皮生長因子(hEGF)基因序列,利用大腸桿菌大量表達(dá)重組hEGF(rhEGF)包涵體,經(jīng)過包涵體純化復(fù)性獲得高活性的rhEGF。方法:采用全基因合成優(yōu)化后的序列,克隆至pET-30a表達(dá)載體中,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),將rhEGF包涵體用尿素溶解后過Ni柱純化并稀釋復(fù)性,根據(jù)藥典對得到的rhEGF進行純度及活性測定。結(jié)果:構(gòu)建了rhEGF的表達(dá)載體pET-30a-rhEGF,表達(dá)出的蛋白主要存在于包涵體中,相對分子質(zhì)量為6.5×10^3,包涵體經(jīng)過純化復(fù)性后獲得的rhEGF純度可達(dá)92.8%,生物活性約4.94×10^7IU/mg。結(jié)論:得到了具有較高活性的rhEGF。
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生物技術(shù)通訊雜志
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