摘要:目的觀察沉默低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)基因后對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響。方法實(shí)驗(yàn)分3組,干擾組(轉(zhuǎn)染表達(dá)HIF-1α-shRNA的質(zhì)粒)、對照干擾組件(轉(zhuǎn)染陰性對照shRNA序列)及未處理組。干擾組利用前期構(gòu)建的HIF—1α基因的短發(fā)夾RNA(shRNA)沉默HIF-1α基因,構(gòu)建HIF-1α-shRNA慢病毒表達(dá)載體,存脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U87。采用RT-PCR和Westernblotting檢測HIF-1α基因干擾效率.MTT法檢測細(xì)胞生長增殖能力,遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的體外遷移能力,Transwell小室模型檢測細(xì)胞的體外侵襲及轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果RT—PCR和Westernblotting實(shí)驗(yàn)證實(shí),與對照干擾組及未處理組比較,十?dāng)_組細(xì)胞月HIF-1α mRNA表達(dá)水平明顯下降,蛋白條帶明顯減弱。MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示,干擾組細(xì)胞增殖水平較其他2組明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)中,未處理組、對照干擾組、干擾組穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(125.2±10.8)個(gè)、(118.3±8.3)個(gè)、(60.9±5.4)個(gè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。結(jié)論HIF-1α—shRNA能有效抑制U87細(xì)胞株HIF-1α mRNA及蛋白的表達(dá).并能抑制U87細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力。
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